一、盲肠结扎穿孔法（CLP）

特点：最接近临床脓毒症病理过程，可模拟多菌性腹膜炎和全身炎症反应，死亡率可控，是研究脓毒症的金标准模型。
操作步骤：

1. 术前准备
   • 动物选择：C57BL/6 或 BALB/c 雄性小鼠（6-8 周龄，体重 20-25g），术前禁食 12 小时。
   • 麻醉：腹腔注射 1% 戊ba比妥钠（50mg/kg）或水合氯醛。
2. 手术操作
   • 腹部切口：左下腹剃毛消毒后，纵向切开 1-2cm 皮肤，暴露腹膜。
   • 盲肠处理：
     • 结扎：用 3-0 不可吸收缝线结扎盲肠远端 50%-75%（结扎比例决定模型严重程度，结扎 75% 盲肠导致重度脓毒症，4 天内全部死亡）。
     • 穿孔：21 号针头穿刺盲肠 1-2 次，挤出少量肠内容物至腹腔。
   • 关腹：逐层缝合腹膜和皮肤，皮下注射 1mL 预温生理盐水复苏。
3. 术后护理
   • 补液：术后 6 小时皮下注射生理盐水（30mL/kg）和抗生素（如头孢曲松 30mg/kg）。
   • 监测：观察小鼠状态（呼吸、活动度、分泌物等），按 脓毒症评分标准（7 项指标，总分 0-28 分）评估。

二、LPS 诱导法

特点：操作简便，炎症反应快速，适用于急性炎症机制研究，但缺乏多菌感染的真实性。
操作步骤：

1. LPS 配制：用生理盐水溶解大肠杆菌 LPS，浓度按目标剂量调整（常用 10-15mg/kg）。
2. 腹腔注射：
   • 雄性 C57BL/6 小鼠（6-7 周龄）腹腔注射 LPS（剂量依模型严重程度选择：10mg/kg 诱导心肌损伤，15mg/kg 导致高死亡率）。
3. 观察指标：
   • 血清炎症因子（TNF-α、IL-6）、器官损伤标志物（ALT、AST、BUN、Cr）检测。
   • 组织病理学检查（心、肝、肺、肾炎症浸润情况）。

三、粪便匀浆法

特点：模拟肠源性脓毒症，适用于肠道菌群失调相关研究。
操作步骤：

1. 粪便处理：取健康小鼠新鲜粪便，与无菌生理盐水按 1:9 比例制成匀浆，离心取上清液。
2. 腹腔注射：以 10% 粪便匀浆按 5mL/kg 剂量注射至小鼠腹腔。
3. 评估：48 小时后检测血清 LPS、IL-6、TNF-α 水平及脏器病理变化。

四、模型评价指标

1. 生存率分析：CLP 模型中，结扎 75% 盲肠的小鼠 3 天死亡率达 ，中度模型（结扎 50%）7 天存活率约 50%。
2. 生化与炎症指标：
   • 血液：WBC、NEU%、血小板计数、NLR（中性粒细胞/淋巴细胞比值）。
   • 血清：IL-6、TNF-α、ALT、AST、BUN。
3. 组织病理学：肺水肿、肝细胞坏死、肾小管损伤等评分。

五、注意事项

1. 无菌操作：CLP 手术需严格消毒，避免继发感染干扰结果。
2. 剂量控制：LPS 剂量需预实验确定，避免过度炎症反应导致急性死亡。
3. 模型选择：
   • CLP 适合长期机制研究，LPS 适合急性炎症分析，粪便匀浆适用于肠道菌群相关脓毒症。