应用简介

自噬与多种生理反应相关，比如肿瘤，炎症，免疫应答，氧化应激等。通常情况下，对于自噬的研究，除了发生的机制本身外，更多的是将自噬与各种生命活动或者疾病结合起来

噬在肿瘤的发生发展，炎症反应，氧化应激等不同生物学功能的作用，

技术原理

自噬是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，最终将吞食物在溶酶体内降解的过程。自噬体(自噬体)为双层膜包被的因形或椭因形结构，内含细胞质，长寿蛋白质和异常

损伤或多余细胞器如线粒体，粗面内质网和微体，病毒和细菌等。

自噬过程:

1、细胞接受自噬诱导信号后，在胞浆的某处形成一个小的类似"脂质体"样的膜结构，然后不断扩张，被称为Phagophore。

2、Phagophore不断延伸，将胞浆中的任何成分，全部揽入，然后"收口"，成为密闭的球状的autophagosome，即"自噬体"，

3、自噬体形成后，可与细胞内吞的吞噬泡、吞饮泡和内体融合(这种情况不是必然要发生的)。

4、自噬体与溶酶体融合形成autolysosome，期间自噬体的内膜被溶酶体酶降解，2者的内容物合为一体，自噬体中的"货物"也被降解，产物(氨基酸、脂肪酸等)被输送到胞浆中，1

用，而残渣或被排出细胞外或滞留在胞浆中，

实验方法

细胞培养 转染或药物处理 按细胞自噬试剂 拍照，并按照相关检测方

盒进行处理 法进行细胞自噬的检测

技术总结

一、自噬诱导剂

1、BredeldinA/Thapsigargin/Tunicamycin:模拟内质网应激

2、Carbamazepine/L-690，330/LithiumChloride(氣化锂):IMPase抑制剂(即Inositolmonophosphatase，肌醇单磷酸酶)

3、Earle's平衡盐溶液:制造饥饿

4、N-Acetyl-D-sphingosine(C2-ceramide):ClassIPI3KPathway抑制剂

5、Rapamycin:mTOR抑制剂

6、XestosponginB/C:IP3R阻滞剂

二、自噬抑制剂

1、3-Methyladenine (3-MA):(ClassllIPl3K) hVps34抑制剂

2、BafilomycinA1:质子泵抑制剂

3、Hydroxychloroquine(羟氯喹):Lysosomallumenalkalizer(溶酶体腔碱化剂

除了选用上述工具药外，一般还需结合遗传学技术对自噬相关基因进行千预:包括反义RNA千扰技术(Knockdown)、突变株筛选、外源基因导入等。