应用简介

细胞划痕是种简单易行的检测细胞运动的方法，实验成本低，可以用来检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力。

技术原理

创伤愈合实验是一种简单、廉价的方法，也是最早发展起来的研究定向细胞在体外迁移的方法之一。该方法模拟了细胞在体内愈合过程中的迁移过程。基本步骤包括在细胞单层中创建一个“伤口”，在细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像以关闭伤口，以及比较图像以确定细胞迁移速率。

实验方法

一、前期准备

1. 无菌处理
   • 所有需灭菌器械（如移液枪头、培养皿）经高压灭菌；直尺与Marker笔在超净台内紫外照射30分钟消毒。

二、实验操作流程

1. 划痕标记

   • 在6孔板背面，使用Marker笔配合直尺均匀绘制横线，间距0.5-1cm，确保横线贯穿整个孔底。

2. 细胞接种

   • 每孔接种约5×10⁵个细胞（具体数量根据细胞生长特性调整，以 overnight 铺满孔底为宜），确保细胞悬液覆盖所有划痕区域。

3. 划痕制造

   • 次日，用200μL移液枪头垂直于孔底横线划痕（枪头需与直尺对齐，保持垂直角度），每孔至少划过5条横线。

4. 细胞洗涤与培养

   • 用PBS轻柔洗涤细胞3次， 去除划下的细胞碎片；更换为无血清培养基。

5. 培养与观察

   • 将6孔板置于37℃、5% CO₂培养箱中培养，分别在0h、6h、12h、24h取样并拍照记录划痕愈合情况。

注意事项

1、一般做划痕实验，都是在无血清或者底血清状态下培养的，否则细胞增殖就不能忽略。

2、按照6孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成若千交叉点，作为固定的检测点，这就解决了前后观察时位置不固定的问题。

3、划痕法测量适用的细胞范围较小，一般只适用于上皮细胞，纤维样细胞。

4、虽然无血清培养可以忽略细胞增殖的影响，但是由于细胞内信号传导系统整体性的下调节，细胞迁移的速度也会慢很多。