应用简介

血管生长是肿瘤发生的关键步骤。无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤，一旦生长直径超过1~2mm，都会有血管生成，这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。多数恶性肿瘤的血管生成密集且生长迅速，因此，血管生成在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用，抑制这一过程将能明显阻止肿瘤组织的发展和扩散转移。体外的血管生成实验能很好的模拟肿瘤的血管发生过程，并且适合研究药物对这一过程的影响。

技术原理

应用Matrigel模拟机体环境，上面接种肿瘤细胞，观察血管生成情况

实验方法

1. 细胞预处理

• 细胞培养：将血管内皮细胞（如HUVEC）在含10%胎牛血清的ECM培养基中培养至对数生长期，确保细胞融合度达70%-80%。
• 干预处理：根据实验需求进行细胞转染（如siRNA或过表达质粒）或药物处理（设置浓度梯度），继续培养24-48小时。

2. 基质胶铺板与细胞接种

• Matrigel准备：将Matrigel基质胶在冰上融化，按50-100μL/孔均匀铺于96孔板，37℃孵育30分钟使其凝固成胶状。
• 细胞接种：消化并调整细胞浓度至2×10⁴-5×10⁴ cells/mL，每孔加入100μL细胞悬液，轻轻晃动培养板使细胞均匀分布。

3. 血管生成观察与定量

• 培养条件：37℃、5% CO₂培养箱中孵育6-24小时（根据细胞类型调整时间），期间避免频繁移动培养板。
• 形态学观察：在倒置显微镜下观察血管样结构形成，于0h、6h、12h、24h拍照记录。
• 定量分析：使用ImageJ软件测量血管分支点数、管腔长度及网格形成数量，计算相对血管生成能力。

技术总结

1、实验前一天需要将Matrigel置于冰盒，放入冰箱中，同时需要准备一些预冷的枪头用于吸取Matrigel胶;

2、将Matrigel胶加到血管生成载玻片时注意枪头要垂直于内孔的正上方加入Matrigel，防止有Matrigel流经上孔而留下残留胶;

3、需要按照细胞的生长速度定时采集图像，并且对其成管长度、覆盖面积、成环数和结点进行测量和记录，并且对其进行统计分析;

4、分上下孔的ibidi血管生成载玻片能去除凹液面，使成像效果更好。

5、肿瘤血管生成是一个极其复杂的过程，一般包括包括血管内皮基质降解、内皮细胞移行、内皮细胞增殖、内皮细胞管道化分支形成血管环和形成新的基底膜等步骤。肿瘤血管生成的发生一方面是由于肿瘤细胞释放血管生成因子激活血管内皮细胞，促进内皮细胞的增殖和迁移，另外一方面也是因为内皮细胞旁分泌某些血管生长因子刺激肿瘤细胞的生长。肿瘤细胞和内皮细胞的相互作用自始至