应用简介

裸鼠皮下荷瘤是指将人源或鼠源细胞注射到免疫缺陷的裸鼠皮下，通过施加药物或其它条件来验证细胞成瘤或转移能力的实验方法。裸鼠肿瘤模型是研究肿瘤学、免疫学、药品与生物制品的安全性评价以及有效性筛选等研究课题的基础。

裸鼠皮下成瘤模型

裸鼠是具有一定免疫缺陷的小鼠，利用这一特点可以将肿瘤细胞移植到裸鼠皮下或体内，肿瘤细胞可以吸收裸鼠自身的营养进行生长或转移而不会被小鼠免疫细胞杀伤，利用这一特点可以研究肿瘤细胞在有机体内成瘤能力、药物对肿瘤细胞杀伤能力等问题。

小鼠皮下肿瘤模型构建步骤

一、细胞准备

1. 细胞培养与扩增
   • 常规培养目标肿瘤细胞（如癌细胞系），待细胞融合度达80%-90%时，用胰酶消化并离心收集（1000rpm，5分钟）。
   • 用无菌生理盐水重悬细胞，调整浓度至 1×10⁷ cells/mL（每100μL含1×10⁶个细胞），冰上保存备用。

二、动物接种操作

1. 小鼠固定与注射部位选择

   • 左手抓取SPF级裸鼠（或免疫缺陷小鼠），固定其头部与四肢，暴露右侧腋下皮肤（常用接种部位）。
   • 75%酒精消毒注射部位皮肤，待酒精挥发后进行操作。

2. 细胞悬液接种

   • 使用1mL无菌注射器抽取细胞悬液，排尽气泡后，以45°角刺入皮下组织（深度约5mm）。
   • 缓慢推注100μL细胞悬液，注射完毕后 旋转注射器 缓慢拔出，轻压针孔30秒防止液体渗漏。

三、肿瘤生长观察与后续处理

1. 饲养与监测

   • 将接种后的小鼠放回SPF级动物房，自由摄食饮水，每日观察精神状态及接种部位。
   • 接种后7-10天开始测量肿瘤体积，公式：体积=长径×短径²×0.52，当肿瘤体积达1000mm³或出现溃烂时终止实验。

2. 样本收集

   • 颈椎脱臼法处死小鼠，无菌条件下剥离肿瘤组织，拍照记录后进行后续检测（如HE染色、Western blot、qPCR等）。

技术总结

在裸鼠荷瘤实验操作中有几点需要特别注意:

细胞状态对成瘤影响很大，在计划做荷瘤实验时务必确保细胞处于一个较好的状态，一般注射细胞数目不少于1*106个。

▲虽然裸鼠具有一定的免疫缺陷，但并不等于完全没有排异反应，一般选择年龄不超过7周龄的裸鼠进行实验，年龄太大可能会影响成瘤效果。

▲注射位点的选择也有一定技巧性，一般选择裸鼠腋下位置注射是因为这个位置血流丰富，易于短时间成瘤。

问题解答

▲瘤子长不出来是怎么回事?

一方面可能是细胞状态差，活力不好，或是肿瘤细胞不易成瘤，需加入Matrigel辅助或增大接种量或更换细胞系;一方面可能是小鼠周龄太大，或小鼠免疫排斥，建议更换免疫缺陷程度更大的小鼠(Nod-scid小鼠，NOG小鼠>Nude裸鼠)

▲小鼠瘤子长起来又消失?

肿瘤块先缩小，后变大很常见，很可能是炎症反应，肿瘤细胞被小鼠自身吸收，继续观察肿瘤细胞吸收之后是否经过几周还能长出来，长不起来建议换鼠。

▲均一性很差，肿瘤体积差距较大?

如果荷瘤分组发现小鼠肿瘤体积差距很大，这可能跟小鼠周龄及接种细胞量不一致导致，建议重新做实验分组。

▲是否可以在一只小鼠进行多个点荷瘤?

不可以，一只老鼠就只能接种一个点。因为一个老鼠身上有多个肿瘤块的情况下，可能会相互影响。

▲是否应用免疫抑制剂加速肿瘤生长

如果裸鼠荷瘤不生长，可以参考文献，用免疫抑制剂如环磷酰胺(抑制裸鼠nk细胞活性)促进生长;不过 不要为了缩短造模周期来加速生长，因为可能会造成溃烂这样就不得不中止实验。所以一般情况下，应尽量符合细胞系本身的生长特性，不应过多地人为的干扰。