应用简介

糖尿病(diabetesmellitus,DM)已成为严重危害人类健康的公共卫生问题。DM及其并发症不仅严重影响糖尿病患者的生活质,同时也是致残、致死的重要原因。因此,建立合适的糖尿病动物模型,阐明DM及其并发症的发病机制就显得尤为重要

大鼠糖尿病模型

一股糖尿病动物模型制备方法主要有:手术切除胰腺、化学药物诱导、自发性糖尿病动物模型、转基因动物等。此方法为化学药物诱发的DM模型:采用链脲佐菌素腹腔注射可诱发DM，链脲佐菌索(streptozotocinSTZ)的参考剂为50~150mg/kg。STZ是一种含亚硝基的化合物,进入体内可通过以下机制特异性地破坏胰岛B细胞

(1)STZ直接破坏胰岛细胞:主要见于注射大剂量STZ后。STZ注射后可引起细胞内辅酶I(NAD)的浓度下降,NAD依赖性能量和蛋白质代谢停止,导致细胞死亡

(2)通过诱导一氧化氮(NO)的合成,破坏胰岛细胞

(3)STZ激活自身免疫过程,进一步导致B细胞的损害:小剂注射STZ可破坏少胰岛B细胞,死亡的胰岛B细胞可作为抗原被巨噬细胞吞噬,产生TH1刺激因子,使TH1细胞系占优势而产生IL-2及IFN-,在胰岛局部促使炎性细胞浸润,并活化释放IL-1、TNF-α、IFN-y、NO和H2O2等物质杀伤细胞。死亡细胞又可作为自身抗原,再次递呈给抗原递呈细胞进行处理,释放细胞因子,放大细胞损伤效应,最终诱发DM,

实验方法

主要试剂及配制方法

柠模酸、柠模酸三钠、链脲佐毒索(Streptozocin,STZ）

1.柠模酸钠缓冲液配制:将2.10g柠模酸加入双蒸水100ml配成柠模酸母液，称为A液;将2.94g柠模酸三钠加入双蒸水100m配成柠檬酸钠母液，称为B液;将A、B液按1:1.32比例混合，pH计测定pH值，调定溶液pH=4.0，即是所需配制STZ的0.1mol/L柠模酸钠缓冲液,

2.STZ溶液的配制:将STZ溶于0.1mol/L柠檬酸钠缓冲液中，新鲜配制成10 mg/mL浓度的STZ溶液，并用0.22um滤菌器过滤除菌。注意避光配制，现用。

应用:疾病模型

模型评价

1.大体观察:正常组大鼠体型适中，精神状态良好，动作自如，反应灵敏，毛发平伏有光泽。而糖尿病大鼠体重变轻，精神菱，反应迟钝，毛竖无光泽，动作迟缓，弓背体，尿显著增加。糖尿病大鼠较正常组体重显著减轻，心脏系数、肝脏系数较正常组有显著增加，且有统计学意义。

2.空腹血糖、甘油三酯和总胆固醇水平的变化:正常对照组的空腹血糖、甘油三酯和总胆固醇水平在实验前后均无显著差异;DM组的空腹血糖、甘油三酯和总胆固醇水平显著高于对照组。

组织病理学

1.糖尿病大鼠心脏组织形态学的变化

经HE染色可见正常对照组大鼠心肌纤维排列整齐，致密，结构清晰，细胞核染色质分布均匀，细胞外间质较少，微血管结构正常，可见少量成纤维细胞，间质无明显的炎症细胞浸润;DM模型组大鼠心肌纤维排列紊乱，心肌细胞肥大，细胞间隙增大，结构不清晰，有的细胞核膜皱缩，核固缩，并有炎症细胞浸润，肌细胞间也可见成纤维细胞浸润。

2.糖尿病大肾脏组织形态学的变化

HE染色显示，DM组大鼠肾小球肥大增生，肾小球系膜基膜增厚，肾小管空泡变性，胞质空亮,

3.糖尿病大鼠肝脏组织形态学的变化

经油红O染色可见DM组大鼠肝内脂滴较大，红色脂滴明显，肝脏可见显著的脂质沉积

4.糖尿病大鼠肺脏组织形态学的变化

HE染色显示，对照组大鼠肺组织结构清晰，肺泡分布均勾，肺泡隔、支气管壁完整，肺间质分布均勻，少见炎性细胞浸润;DM组大鼠肺组织结构紊乱，部分肺泡腔菱缩、塌陷，可见肺大泡，支气管壁增厚，肺间质和血管周围细胞外基质增多，成纤维细胞增多，并有大量炎症细胞浸润。