应用简介

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种以关节滑膜炎、破坏性关节病变为主要特征的慢性、自身免疫性疾病，致畸、致残率极高。其基本病理改变是滑膜炎，急性期滑膜肿胀、渗出，中性粒细胞浸润;慢性期滑膜增生肥厚，形成血管;后者是造成关节破坏、关节畸形、功能障碍、使疾病进入不可逆阶段的病理基础。RA是一种复杂的免疫性疾病，目前多认为本病属于一种自身免疫性疾病，其始动因子尚不清楚，可能是感染因子(如病毒、支原体或细菌等)进入人体后，其所含某些成分(如糖或糖肽碎片)被关节内滑膜细胞摄取并组合到滑膜细胞所合成的蛋白多糖中，使其结构发生改变而具抗原性。此外还和遗传因索有关，已发现RA 的易感基因。RA 的致病机理目前还没有完全了解，但其中细胞因子IL-1，TNF-α在发疾病中的关键作用已经有了深入而广泛的研究，而IL-17是近年发现的一个独特的家族，在RA发病进程中发挥重要作用。为探明类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)的病因、病理学、免疫学、临床等方面的机制，寻找更有效的 RA 的方案，科学家建立了一些比较成熟的整体动物病理模型。

大鼠免疫性关节炎造模

20世纪50年代由细菌学家Freund创立佐剂性关节炎(AA)，又称是弗氏佐剂关节炎，是免疫性关节炎动物模型的基本方法。由于弗氏佐剂中含有灭活的结核杆菌和矿物油，可诱发机体产生免疫反应，利用此特点可以构建大鼠免疫性关节炎模型。将液体石蜡高压灭菌，BCG80C灭活1h，把BCG加入液体石蜡配成10g/L的乳剂，充分碾磨、混匀，即得CFA，于大鼠左后足跖皮内注射CFA0.1ml致炎。

该模型广泛应用于类风湿性关节炎的病因探索、新药开发、新 方法筛选等方面。

结核分枝杆菌感染模型构建及多维度评价方案

一、疫苗/菌剂制备

1. 佐剂乳化
   • 按体积比1:1将液体石蜡与无水羊毛脂混合，磁力搅拌30分钟至形成均质乳剂（W/O型佐剂）。
   • 加入减毒卡介苗（BCG，浓度1×10⁶ CFU/mL）或灭活结核分枝杆菌（H37Rv株，1×10⁸ CFU/mL），继续搅拌10分钟制成稳定混悬液。

二、动物接种

1. 皮下注射
   • 选择6-8周龄C57BL/6小鼠（或豚鼠），用75%酒精消毒右后足跖部皮肤。
   • 使用1mL注射器抽取0.1mL佐剂-菌剂复合物，缓慢注射于足跖皮下（注射后可见局部轻微隆起），单只动物仅接种1个部位。

三、综合评价体系

1. 形态学观察

   • 局部反应：接种后3、7、14天测量足跖肿胀度（游标卡尺测定直径变化），记录红斑、溃疡等皮肤反应。
   • 脏器病理：处死动物后取肺、肝、脾组织，HE染色观察肉芽肿形成及炎症细胞浸润；抗酸染色检测结核杆菌分布。

2. 血清学检测

   • 抗体水平：ELISA法测定血清中抗结核特异性抗体（如IgG1、IgG2a）滴度，评估体液免疫应答。
   • 细胞因子：CBA多因子检测血清中IFN-γ、TNF-α、IL-12等 Th1型细胞因子水平，反映细胞免疫状态。

3. 超微结构分析

   • 取病变肺组织，经2.5%戊二醛固定后制作超薄切片，透射电镜观察结核杆菌形态（如杆菌长度、荚膜结构）及宿主细胞（巨噬细胞）吞噬情况。

模型特点

原发病变主要表现为早期致炎部位的炎症反应，致炎后18h，左足肿胀达峰值，持续3d后逐渐减轻，8d后再度肿胀，继发病变一般出现于致炎后的10d左右，表现为对侧和前足肿胀，且进行性加重，行动不便，耳和尾部出现关节炎小结，变应性角膜炎及体重下降，这些表现接近人RA。用足爪仪测出足爪明显肿胀。MRI检测AA大鼠关节局部病理改变，发现继发性对侧足爪在病程中有两个明显阶段， 阶段出现于致炎后10~18d，以滑膜炎、滑膜纤维索沉着、关节肿胀为特征的关节周围炎症; 阶段在18~30d，表现为持续性软组织炎症，伴有骨质溶解性骨膜炎、骨膜新骨形成、单核细胞浸润、血管翳形成，关节完全粘连。通过MRI发现的改变与生物化学、细胞学、组织学病程相一致。大鼠AA是以多发性关节炎为特征的、由T细胞介导的慢性全身性免疫性炎症。表现为Ts细胞功能、T细胞致分裂索反应低下，其免疫学指标与CIA稍有不同。AA大鼠血清中蛋白水平与炎症参数(关节肿胀度、IL-6活性等)呈平行改变。血清中结合珠蛋白、黏蛋白、a2-微球蛋白、分泌性蛋白因子-3、a-抗胰蛋白酶、C-反应蛋白等均升高，而激肽释放酶结合蛋白、a抑制因子、载脂蛋白A-I、载脂蛋白A-IV、卵清蛋白、转铁蛋白等下降。在类风湿关节炎发病中，内分泌系统分泌的甾体类激素、性激索等以及外周神经系统分泌的去甲肾上腺索或P物质等介质到达滑膜细胞与相应受体特异性结合，通过反馈系统调节局部的炎症过程。交感神经系统分泌的去甲肾上腺索、肾上腺索、内啡肽和甲硫氨酸脑啡肽(Met-Enk)，可以促进ra患者滑膜成纤维细胞il-6、il-8的分泌。