技术原理

油红O对脂滴的染色机制一般认为是物理学上的溶液作用或吸附作用，借溶液作用使脂质染色，即油红0先溶于60%异丙醇中，然后切片浸入油红O染液中时，油红O在组织脂质的溶解度较60%异丙醇中的溶解度高，所以在染色时油红O从60%异丙醇中转移入脂质中使脂滴显示红色。

油红O脂肪染色实验流程

一、样本预处理

1. 冰冻切片晾干
   • 样本类型：新鲜组织经液氮速冻后制作的冰冻切片（厚度通常5-10 μm）。
   • 操作：切片置于室温晾干10-30分钟，避免水分残留（若切片潮湿，会导致染色不均）。

二、脂肪染色与分化

1. 油红染色

   • 染料特性：油红O是一种脂溶性偶氮染料，可特异性溶解并结合中性脂肪，使脂滴呈亮红色。
   • 染色条件：切片浸入油红O染液（通常用60%异丙醇配制）中室温染色15-20分钟，期间避免染液干涸。

2. 分化

   • 作用：用60%异丙醇快速漂洗2-3次（每次10-30秒），去除组织背景的非特异性染色，使脂滴与背景对比更清晰。
   • 关键：分化时间不宜过长，以免脂滴中的染料被洗脱。

三、核染色与后处理

1. 苏木素染色

   • 对比染色：用苏木素染液（如Harris苏木素）浅染细胞核30秒-1分钟，使细胞核呈蓝紫色，与红色脂滴形成颜色对比。

2. 分化与返蓝

   • 分化：用1%盐酸乙醇分化数秒，去除核染色背景。
   • 返蓝：自来水或弱碱性溶液（如氨水）浸泡1-2分钟，使细胞核从红色转为蓝紫色。

3. 甘油明胶封片

   • 特殊处理：因油红O为脂溶性染料，需用甘油明胶（水溶性封片剂）封片，避免使用含二甲苯的中性树胶（会溶解脂滴）。
   • 操作：滴加甘油明胶，覆盖盖玻片，室温晾干后即可镜检。

4. 显微镜镜检

   • 观察结果：脂滴呈亮红色，细胞核呈蓝紫色，适用于脂肪组织（如 adipose 组织）、肝脏脂肪变性、动脉粥样硬化斑块等样本的脂肪含量分析。

技术特点与应用

• 特异性：仅对中性脂肪（甘油三酯）染色，不与磷脂、胆固醇结合，适合区分不同脂质类型。
• 样本要求：必须使用冰冻切片（石蜡切片需脱脂处理，会丢失脂肪），适用于新鲜或冷冻保存的组织。
• 临床应用：非酒精性脂肪肝（NAFLD）诊断、肥胖模型脂肪分布观察、脂肪细胞分化研究等。

送样运输要求

1、样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上，常温运输送样。切勿固定时间过长，切勿冷冻结冰。

2、新鲜组织千冰运输。

3、冰冻切片-20°℃运输。